Page 16 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
P. 16
Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
antara molekul analit dengan fase diam atau analit dengan
fase gerak, karena perbedaan afinitas dengan fase diam
inilah senyawa-senyawa dapat dipisahkan antara satu
dengan yang lain. Perbedaan afinitas molekul-molekul
analit dengan fase diam inilah dasar mekanisme adsorpsi.
Kedua, pemisahan partisi karena senyawa analit yang
sama dibagi antara dua fase. Peristiwa ini dapat terjadi jika
fase gerak dan fase diam adalah cairan (kromatografi cair-
cair). Rancangan fase diam dan fase gerak lebih sederhana
dan pemisahan bisa dioptimasi dengan baik. Konsep like
dissolves like, interaksi terjadinya ikatan hidrogen berlaku
disini. Dianalogikan dengan solute terlarut dalam dua cairan
(pelarut) yang tidak campur. Solute akan terlarut sebagian
pada pelarut yang satu dengan konsentrasi [x] 1 dan
sebagian lain terlarut pada pelarut ke dua [x] 2. Bila terjadi
kesetimbangan distribusi diatara [x] 1 dan [x] 2 maka
mempunyai nilai tetapan partisi (Ka), nilai K tetap pada
temperature tetap.
Ketiga, kromatografi fase balik (reversed phase).
Mekanisme pemisahan mirip dengan kromatografi partisi
dan adsorpsi, namun fase diam dibuat tidak polar dan
hidrofobik sedangkan fase geraknya polar dan hidrofil.
Pemisahan yang terjadi agak berbeda dengan mekanisme
partisi biasa, karena interaksi molekuler terjadi lebih kuat
daripada pelarutan dalam mekanisme partisi.
Keempat, mekanisme pertukaran ion adalah salah satu
cara pemisahan kimia yang penting di mana di permukaan
terjadi reaksi kimia. Dengan demikian, pemisahan harus
dapat dihitung berdasarkan kapasitas penukar ionnya. Fase
diamnya ada yang mengandung penukar kation maupun
anion. Fase gerak akan mengalir dan membawa hasil
pertukaran ion di permukaan fase diam keluar dari kolom.
Biasanya fase diam berupa resin yang mengandung
sejumlah tertentu penukar ion, dan jumlah yang dimiliki ini
merupakan kapasitas kolomnya.
Pada awalnya kromatografi dengan mekanisme ini
digunakan untuk pemisahan unsur tanah jarang dan
berbagai hasil pemecahan pada penelitian energi atom.
10
