Page 24 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

b. Optimasi kolom

Pekerjaan utama dalam kromatografi terjadi di dalam
kolom. Jika kinerja kromatografi tidak sempurna maka
kolomlah yang harus dimodifikasi. Ada banyak faktor yang
harus diperhatikan dalam memaksimalkan kinera kolom.
Secara umum, ada teori laju dan teori pelat yang
menggunakan analogi berbeda untuk pemisahan yang
terjadi. Kedua teori ini mencoba menjelaskan asal mula
ketidakidealan proses elusi di dalam kolom dan
memperbaikinya sesuai penyebabnya. Oleh karena itu,
banyak parameter baru ditemukan dan diubah-ubah sampai
diperoleh hasil pemisahan yang lebih sempurna.

Teori Piring/Pelat
Martin dan Synge menyatakan bahwa kolom kromatografi
dapat diasumsikan seperti sebuah kumpulan pelat teoritis,
dimana terjadi kesetimbangan pemisahan sampai pada
akhirnya didapatkan distribusi komponen elusi campuran
yang akan terelusi sepanjang kolom. Jumlah piring teoritis
adalah hasil dari pemisahan dalam kolom sistem tertentu.
Artinya isi kolom, laju alir, sifat alami komponen yang
dipisahkan juga turut menentukan lebar puncak
kromatogram, bukan hanya dari rancangan kolom itu
sendiri. Jika panjang kolom, L ditambah, maka harga n
akan bertambah, dan waktu retensi juga bertambah secara
proporsional. Dengan demikian, harga H dimana harga
yang minimum menunjukkan efisiensi yang tinggi dari
kolom dalam sistem kromatografi yang telah ditetapkan.

Jumlah Pelat Teoritis

( ) ( ) ( ) .................(8)

⁄

..................................(9)

Tinggi Pelat Teoritis
.........................................(10)

18