Page 27 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Harga H p dapat diperkecil dengan menggunakan partikel
yang sebaran ukurannya sempit dan dengan cara
mengemas kolom secara baik. Dengan tingkat teknologi
masa sekarang harga H p adalah 10–50% dari harga total H.
H p dapat diminimumkan dengan memakai partikel bergaris
tengah kecil.

Penyebab Kedua: Difusi Longitudinal
Arah aliran fase gerak berbeda dengan arah aliran analit.
Fase gerak melewati aliran laminar antara partikel fase
diam (Gambar 7). Aliran lebih cepat di pusat 'saluran'
daripada di dekat partikel. Panah pada Gambar 7
merupakan vektor kecepatan fase gerak (semakin panjang
panah, semakin besar kecepatan aliran lokal). Difusi Eddy
dan distribusi aliran dapat dikurangi dengan mengepak
kolom dengan partikel berukuran merata. Prinsip pertama,
yang menjadi dasar kolom yang bagus adalah bahwa
pengepakan harus terdiri dari partikel dengan distribusi
ukuran sesempit mungkin. Rasio antara diameter partikel
terbesar dan terkecil tidak boleh melebihi 2, (1.5 lebih baik,
contoh: ukuran partikel terkecil 5µm, ukuran partikel
terbesar 7.5µm). Pelebaran akibat distribusi difusi eddy dan
aliran sedikit terpengaruh, jika tidak sama sekali, oleh
kecepatan aliran fase gerak.

Gambar 7. Aliran distribusi dalam kromatografi

Gambar 8. Band diperluas dengan difusi longitudinal. Kiri:
Contoh zona setelah injeksi, akan menyebar di semua
aksis (arah panah). Kanan: Contoh zona pada kemudian

21