Page 28 - BUKU AJAR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)

Buku Ajar High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

hari, akan lebih besar dari sebelumnya karena difusi dan
juga telah diangkut oleh fase gerak yang mengalir.

Molekul sampel menyebar dalam pelarut tanpa pengaruh
eksternal (seperti halnya gula larut perlahan dalam air
bahkan tanpa diaduk).

⁄ ......................................(13)

Dimana
D m : koefisien difusi analit dalam fase gerak
μ : kecepatan aliran dalam cm/detik

H d menyatakan besarnya sumbangan kepada HETP yang
disebabkan oleh difusi longitudinal molekul analit. Faktor
kelikuan yang dinyatakan dengan , berkaitan dengan
derajat kemasan kolom dalam membatasi difusi.
Pemakaian partikel kecil yang seragam untuk kemasan
kolom akan memperkecil faktor kelikuannya karena difusi
dihambat. Laju aliran yang tinggi akan memperkecil waktu
huni di dalam kolom dan ini pun memperkecil H d.

Efek yang tidak menguntungkan pada tinggi pelat hanya
jika: (a) partikel fasa diam kecil, (b) kecepatan fasa gerak
yang terlalu rendah dan kaitannya dengan diameter
partikel, (c) difusi sampel yang relatif besar bertepatan
dengan sistem kromatografi. Prinsip kedua adalah bahwa
kecepatan aliran fasa gerak harus dipilih sehingga difusi
longitudinal tidak memiliki efek buruk. Ini berlaku bila μ >
2Dm = dp, di mana d p diameter partikel.

Penyebab Ketiga: Perpindahan Massal antara Gerak,
'Stagnant Gerak' dan Diam
Analit yang ada di pusat aliran bergerak lebih cepat
dibandingkan Gambar 9 menunjukkan struktur pori dari
partikel fase diam: saluran keduanya sempit dan lebar,
beberapa melewati partikel keseluruhan dan lainnya
ditutup. Pori-pori dilengkapi dengan fase gerak yang tidak
bergerak (stagnan). Molekul sampel yang memasuki pori-

22