Page 20 - Тахианаас хүнсний хордлого үүсгэгч CAMPYLOBACTER SPP.-ийг илрүүлсэн судалгааны дүн

[ШИНЖЛЭХ УХААНЫ МАГИСТРЫН ЗЭРЭГ ГОРИЛСОН БҮТЭЭЛ] Арга зүй [ШИНЖЛЭХ УХААНЫ МАГИСТРЫН ЗЭРЭГ ГОРИЛСОН БҮТЭЭЛ] Арга зүй

Судалгаанд ашигласан Е.тестийн жагсаалт 2.2.3 МОЛЕКУЛ БИОЛОГИЙН ШИНЖИЛГЭЭ
Хүснэгт 4
№ Антибиотикийн бүлэг Антибиотикийн нэр Товчилсон нэр Campylobacter.spp – ын ДНХ-г олшруулах
1 Тетрациклин Тетрациклин ТС ДНХ-г буцалгах аргаар ялгав. Ингэхдээ 1,5мл-ын цодонд (микротубенд) 180мкл
2 Налидикс хүчил NA
3 Цефраплоксацин Cl давхар нэрмэл ус хийж, Campylobacter spp.-ын өсгөвөрөөс (бруцелла шөлөнд 48 цаг
Фтохинолин өсгөвөрлөсөн) 20мкл-ийг хийж холино. Дараа нь буцалж буй халуун усанд 5 минут
4 Норфлоксацин NX
5 Офлоксацин OF буцалгаж, 12 000 эрг/мин-д 5 минут хурилдуурдана. Үүний дараа супернатант (дээд
шингэн хэсэг) – ыг ариун цодонд авна. Ялган авсан ДНХ (супернатант)-ээс 1мкл, Ampli

Нянгийн өсөлтийг саатуулах хамгийн бага концентрацийг тогтоох Tag – 10мкл, ариун нэрмэл ус – 6мкл, праймер тус бүрээс 1мкл (хүснэгт 6) нийт 20мкл
шинжилгээ (Minimum inhibition concentration), Е. Тестийн үр дүнг хэмжих техник – ыг 0,5 мл цодонд хийж урьтал денатураци 95 хэмд 10 минут, 94 хэмд 30секунд, 55
хэмд 30 секунд, 72 хэмд 40 секунд, эцсийн уртасгалт 72 хэмд 3 минут нийтдээ 35
Эмийн бодист мэдрэг чанарыг өсөлт саатсан хамгийн бага тун (мкг/мл)-гаар
циклийн давтамжтайгаар термоциклэрт гүйлгэв. Олшруулсан бүтээгдэхүүнээ 1% - ийн
тогтоож, үйлдвэрлэгчийн санал болгосны дагуу тэсвэржсэн (resistant-R), мэдрэг (sitive- агароз гелийн үүрэнд 100 вольт-д 20 минут гүйлгэн, хэт ягаан туяаны
S) гэж үнэлнэ. Урвалын дүнг хүснэгт 4-ийн дагуу бүртгэнэ.
трансиллюминаторт өвөрмөц банд илрүүлж зургийг хэвлэн авна.

Антибиотикийн мэдрэг чанар тодорхойлох үнэлгээний шалгуур ПГУ-д ашигласан праймерууд
Хүснэгт 5 Хүснэгт 6
Антибиотикийн төрөл Антибиотикуудын концентраци Ангилал Антиген Сонгомол өвөрмөц Урвалын
/ мкг/мл / Праймерийн олиго дараала 5’-3’ бүтээгдэхүүний
хэвшил ген
0,16 мэдрэмтгий хэмжээ
Наладикс хүчил NA
>256 тэсвэртэй F–TTTAGCCTTTGCAACTCCTA cdtC
C.jejuni 524bp
0.002 мэдрэмтгий R–AAGGGGTAGCAGCTGTTAA
Ципроплаксацин CI
>32 тэсвэртэй C.coli F –TAGGGATATGCACGCAAAAG cdtC 313bp
0,016 мэдрэмтгий R –GCTTAATACAGTTACGATAG
Норфлаксацин NX
>256 тэсвэртэй
Офлоксацин OF 0,002 мэдрэмтгий Gуr A ген илрүүлэх
>32 тэсвэртэй Нянгийн өсөлтийг саатуулах хамгийн бага концентрацийг тогтоох
0.016 мэдрэмтгий
Тетрациклин TC шинжилгээний үр дүнд үндэслэн тахианы шулуун гэдэсний арчдаснаас гарган авсан
>256 тэсвэртэй
Campylobacter spp. –ийн өсгөвөрүүдээс буцалгах аргаар ДНХ-ийн ханд бэлтгэнэ. Ampli
Taq – 12,5 мкл, ариун нэрмэл ус – 9,5мкл, праймер тус бүр 1мкл, дээж 1мкл нийт 25мкл-
ыг багтаамжинд урьтал денатураци 95 хэмд 10 минут, 94 хэмд 30 сек, 50 хэмд 30 сек,
72 хэмд 1 мин, эцсийн уртасгалт 72 хэмд 10 минут нийтдээ 35 цикл, давтамжтайгаар
термоциклэрт 96 Well Thermal Cycler (Veriti) гүйцэтгэв. Олшруулсан бүтээгдэхүүнээ
1%-ийн агароз гель ашиглан электрофорезийг 20 минут гүйлгэн, хэт ягаан туяаны
трансиллюминаторт өвөрмөц ванд илрүүлж зургийг хэвлэн авна.

20 21