Page 21 - Тахианаас хүнсний хордлого үүсгэгч CAMPYLOBACTER SPP.-ийг илрүүлсэн судалгааны дүн

[ШИНЖЛЭХ УХААНЫ МАГИСТРЫН ЗЭРЭГ ГОРИЛСОН БҮТЭЭЛ] Арга зүй

2.2.3 МОЛЕКУЛ БИОЛОГИЙН ШИНЖИЛГЭЭ

Campylobacter.spp – ын ДНХ-г олшруулах

ДНХ-г буцалгах аргаар ялгав. Ингэхдээ 1,5мл-ын цодонд (микротубенд) 180мкл
давхар нэрмэл ус хийж, Campylobacter spp.-ын өсгөвөрөөс (бруцелла шөлөнд 48 цаг
өсгөвөрлөсөн) 20мкл-ийг хийж холино. Дараа нь буцалж буй халуун усанд 5 минут
буцалгаж, 12 000 эрг/мин-д 5 минут хурилдуурдана. Үүний дараа супернатант (дээд
шингэн хэсэг) – ыг ариун цодонд авна. Ялган авсан ДНХ (супернатант)-ээс 1мкл, Ampli

Tag – 10мкл, ариун нэрмэл ус – 6мкл, праймер тус бүрээс 1мкл (хүснэгт 6) нийт 20мкл
– ыг 0,5 мл цодонд хийж урьтал денатураци 95 хэмд 10 минут, 94 хэмд 30секунд, 55
хэмд 30 секунд, 72 хэмд 40 секунд, эцсийн уртасгалт 72 хэмд 3 минут нийтдээ 35
циклийн давтамжтайгаар термоциклэрт гүйлгэв. Олшруулсан бүтээгдэхүүнээ 1% - ийн
агароз гелийн үүрэнд 100 вольт-д 20 минут гүйлгэн, хэт ягаан туяаны
трансиллюминаторт өвөрмөц банд илрүүлж зургийг хэвлэн авна.

ПГУ-д ашигласан праймерууд
Хүснэгт 6
Урвалын
Антиген Сонгомол өвөрмөц
Праймерийн олиго дараала 5’-3’ бүтээгдэхүүний
хэвшил ген
хэмжээ
F–TTTAGCCTTTGCAACTCCTA cdtC
C.jejuni 524bp
R–AAGGGGTAGCAGCTGTTAA
C.coli F –TAGGGATATGCACGCAAAAG cdtC 313bp
R –GCTTAATACAGTTACGATAG

Gуr A ген илрүүлэх
Нянгийн өсөлтийг саатуулах хамгийн бага концентрацийг тогтоох
шинжилгээний үр дүнд үндэслэн тахианы шулуун гэдэсний арчдаснаас гарган авсан

Campylobacter spp. –ийн өсгөвөрүүдээс буцалгах аргаар ДНХ-ийн ханд бэлтгэнэ. Ampli
Taq – 12,5 мкл, ариун нэрмэл ус – 9,5мкл, праймер тус бүр 1мкл, дээж 1мкл нийт 25мкл-
ыг багтаамжинд урьтал денатураци 95 хэмд 10 минут, 94 хэмд 30 сек, 50 хэмд 30 сек,
72 хэмд 1 мин, эцсийн уртасгалт 72 хэмд 10 минут нийтдээ 35 цикл, давтамжтайгаар
термоциклэрт 96 Well Thermal Cycler (Veriti) гүйцэтгэв. Олшруулсан бүтээгдэхүүнээ
1%-ийн агароз гель ашиглан электрофорезийг 20 минут гүйлгэн, хэт ягаан туяаны
трансиллюминаторт өвөрмөц ванд илрүүлж зургийг хэвлэн авна.

21