Page 110 - 猪场生产管理手册
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①猪瘟荧光抗体检测
a.扁桃体冰冻切片和组织压片的制备。采取活体或新鲜尸体的扁桃体，按常规方
法用冰冻切片机制成厚度为 4µm 切片，吹干后在预冷的纯丙酮中于 4℃固定 15min，
取出风干。制作压片时，取一小块扁桃体、淋巴结、脾或其他组织，用滤纸吸去表
面液体，然后取一块干净载玻片，稍为烘热，将组织小块的切面触压玻片，作成压
印片，置室温内干燥。
b.染色。用 1/40 000 伊文思蓝溶液将荧光抗体作 8 倍稀释，将稀释的荧光抗体滴
加到标本片上，于 37℃温箱内感作 30~40min。再用 0.01M pH 7.2 PBS 充分漂洗，分
别于 2min、5min、8min 更换 PBS，最后用蒸馏水漂洗 2 次，吹干后滴加缓冲甘油数
滴，加盖玻片封片，用荧光显微镜检查。
c.镜检。在腺窝（隐窝）上皮细胞内可见到明显的猪瘟病毒感染的特异性荧光。
在 100 倍放大观察时能清楚地看到腺窝的横断面，上皮细胞部分呈现新鲜的黄绿色，
腺腔呈红色，其他组织呈淡棕色或黑绿色。高倍放大观察时细胞核呈黑色圆形或椭
圆形，细胞质呈明亮的黄绿色。
d.注意事项。注意废弃物的处理，防止散毒。
②猪瘟单抗酶联免疫吸附试验（ELISA）
检测猪瘟抗体的 ELISA 方法对于开展流行病学调查具有重要的作用。
a.用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做 100
倍稀释，每孔包被 100µL，4℃湿盒过夜。
b.甩去孔内液体，用洗涤液冲洗酶联板 3 次，每次 3~5min，拍干。
c.用 PBS 将待检血清做 400 倍稀释，每孔加 100µl。同时将猪瘟阳性血清、阴性
血清各做 100 倍稀释，对照孔中各加 100µl，置 37℃1.5h~2h。
d.重复 b。
e.用 PBS 将兔抗猪 IgG 酶标抗体做 100 倍稀释，每孔加 100µL，置 37℃1.5h~2h。
f.重复 b。
g.每孔加入底物溶液 100µL，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立
即终止反应，并以阴性孔做空白对照。
h.每孔加入终止液 50µL，用酶联免疫吸附检测仪测定 490nm 波长的光密度
（OD）。
i.结果判定
在猪瘟弱毒酶联板上：OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒
抗体阴性。
在猪瘟强毒酶联板上：OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒
抗体阴性。
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