Page 114 - 猪场生产管理手册

②口蹄疫中和试验

分为体外中和试验和体内中和试验。

体外中和试验：5~7 日龄小鼠对人工接种口蹄疫病毒易感染，产生特征性症状和
规律性死亡。因此利用这一特性进行乳鼠中和试验。操作步骤如下：

a.将待检血清用生理盐水或 pH7.6 的 0.1mol/L PBS 稀释成 1:4、1:8、1:16、1:32、
1:64，分别与等量的 10 口蹄疫乳鼠适应毒混合，37℃水浴保温 60min。
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b.每次试验应设阴性血清（1:8）与 10 病毒的混合液作为阴性对照；已知阳性
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血清与 10 病毒的混合液作为阳性对照，处理方法同步骤 a。
c.每一稀释度血清中和组分别于颈背皮下接种 5~7 日龄乳鼠 4 只，对照组接种 2

只，每只 0.2mL，由母鼠哺乳，观察 5d 判定结果。

d.判定标准：先检查对照鼠，阴性对照鼠应于 48h 内病死，阳性对照鼠应健活。
待检血清任何一组的乳鼠健活或仅死两只，判定该份血清为阳性。以能保护 50%接

种乳鼠免遭病毒感染的血清最大稀释度为乳鼠中和效价。
该法特异性强，结果可靠，简单易行，基层可采用。但存在需时较长，乳鼠易

被母鼠吃掉或咬死，敏感性低等缺点。
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体内中和试验：将待检血清稀释成 1:5，接种乳鼠 12h 或 24h 后，用 10 病毒攻
毒，同时设阴性血清和已知阳性血清（均为 1:5 稀释）作为对照，观察 5d 后判定结

果。在阴性和阳性血清对照成立的前提下，待检血清组的乳鼠健活，判定该份血清
为阳性。反之，则判为阴性。
该方法多用于定性检测，一般不作为定量检测。

③口蹄疫琼脂扩散试验

抗原抗体在琼脂凝胶中，各以其固有的扩散系数扩散，当二者相遇时，在比例
适当处发生结合而形成肉眼可见的沉淀带。通常用于定性检测，但需时间长，敏感
性差，漏检率高。

a.称取琼脂糖或琼胶素 1g、叠氮钠 1g、氯化钠 0.85g，加 pH7.6 的 0.01mol/L PBS

100mL 置电炉加热熔化，趁热倾入平皿中，厚度 3~4mm。
b.琼脂冷却凝固后，用打孔器打成中央 1 孔周围 6 孔的梅花形孔，中央孔径

4~5mm，周围孔径 3mm，与中央孔的孔距 3~4mm。
c.中央孔加已知型别的浓缩抗原，四周孔加不同稀释度的待检血清和阴性、阳性

对照血清（1:2 稀释），静置扩散 1h。
d.移入湿盒内于室温或在 37℃恒温箱内自由扩散 3~5d，也可放置于 4~6℃冰箱

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