Page 119 - 猪场生产管理手册
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制胶 用 1×TAE 电泳缓冲液配制 1%琼脂糖凝胶。
电泳 待胶凝固后，取 5µL PCR 扩增产物点样于琼脂糖凝胶加样孔中，同时加
阳性对照和阴性对照样适量，以 5 V／cm 的电压于 1×TAE 电泳缓冲液中电泳。
染色取 1×TAE 电泳缓冲液 30mL。加入 10mL 染色液，混匀后将胶浸泡 30min，
于紫外灯下观察结果。
e.结果判断
阳性对照出现 400bp 扩增带，阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果
成立。被检样品出现 400bp 扩增带为猪伪狂犬病毒阳性，否则为阴性。
4.猪繁殖与呼吸综合征的实验室检测技术
猪繁殖与呼吸综合征的实验室常用的检测技术包括：应用猪繁殖与呼吸综合征
RT-PCR 诊断试剂盒进行检测和流行病学调查；酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸
综合征抗体；猪繁殖与呼吸综合征抗体快速检测卡。
（1）实验材料
①RT-PCR
猪繁殖与呼吸综合征 RT-PCR 诊断试剂盒、PCR 仪、研钵、试管、离心机、离
心管、EP 管、漩涡振荡器、超净工作台、天平、微波炉、电泳仪、紫外成像仪、琼
脂糖、Hanks 液等。
②酶联免疫吸附试验
猪繁殖与呼吸综合症诊断试剂盒（美国 IDEXX 公司生产的 Herd-chekTM PRRS
酶联免疫检测试剂盒）、待检血清（免疫猪或耐过猪的血清）。
③猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测卡
免疫胶体金层析技术检测卡、离心管、检测对照卡、待检血清。
（2）方法步骤
①反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）
用 PCR 方法可以检测出组织均质物、血清、精液、口腔拭子和肺部冲洗液中的
病毒核酸，RT-PCR 分析方法是用逆转录酶将病毒的 RNA 逆转录为 DNA，然后再对
DNA 进行指数倍扩增至可检测的水平。该方法的敏感性和特异性比较高，检测周期
短，仅在 1~3 天内即可得出结果。PCR 产物可用于测序，从而扩展了该方法的诊断
应用价值。
应用繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR 诊断试剂盒进行检测，具体步骤应参照说明
书进行操作。
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