Page 120 - 猪场生产管理手册
P. 120
②酶联免疫吸附试验（ELISA）
按试剂盒的说明书进行操作，简述如下：
将待检样品（血清）40 倍稀释，取 100µL 分别加入酶标板 PRRS 孔和 NHC 孔，
室温培养 30min。用洗涤液洗涤 3~5 次，甩尽孔内液体，并在滤纸上拍干。每孔加入
PRRS 酶标抗体 100µL，室温作用 30min，用洗涤液洗涤 3~5 次，甩尽孔内液体，并
拍干。每孔加入 100µL 底物（TMP）溶液，室温作用 15min，然后每孔加入 100µL
终止液。混匀，于酶标仪上 630nm 处读数，利用 XCHKIS 软件系统处理数据。
结果判定：其中 PRRS 孔，阴性对照的 OD630≤0.15，阳性对照的 OD630≥0.15，
且细胞孔的阴性和阳性对照的 OD630≤0.12，符合检测的条件，S/P＝（OD 样品病毒
孔－OD 样品细胞孔）/（OD 阳性对照病毒孔－OD 阳性对照细胞孔），结果判定如
下：S/P＜0.4 判为阴性（－）；S/P≥0.4 判为阳性（＋）。
③猪繁殖与呼吸综合征抗体快速检测卡
a.采血 1mL，1500 转/min 离心，用一次性滴管取血清作为检测液。（样品若不能
立即测试，应冷藏保存，超过 24h，应冷冻保存。）
b.将未开封的试纸卡和检测样品恢复至室温。
c.将试纸卡水平放置，用滴管向试纸卡孔缓慢逐滴加入 3 滴不含气泡的检测液。
d.20min 将观察窗内色带与对照卡色带滴度进行对比参照，判断抗体效价水平。
e.结果判断
T 条带色泽≥对照卡中 1:40（效价）位置条带色泽时，样品中猪繁殖与呼吸综合
征病毒抗体的效价较高；
T 条带色泽＜对照卡中 1:40（效价）位置条带色泽时，样品中猪繁殖与呼吸综
合征抗体效价偏低，不够抵御猪蓝耳病病毒的强毒攻击；
T 处无明显色带出现，说明样品中可能不含猪繁殖与呼吸综合征抗体；
T 条带的色泽特别深时，被检猪即使接种了疫苗，也可能已被强毒感染。
（六）猪细菌性传染病检测技术
1.链球菌病的实验室检测
（1）实验准备
培养箱、酒精灯、接种环、美蓝染色液、革兰氏染色液、载玻片、解剖器械、
89
