Page 28 - Бог малын сохор догол өвчнийг оношлох ФХЭБУ-ын эсрэгтөрөгч бэлтгэн сорьсон дүн
P. 28
Бог малын сохор догол өвчнийг оношлох ФХЭБУ-ын эсрэгтөрөгч бэлтгэн сорьсон дүн
агарт 1:1000-1:1000000 харьцаагаар шингэлж 15-20 мкл-ээр хатуу тэжээлт
орчны гадаргууд дусаан тарьж 37 хэмийн 5-10%-ийн СО 2 (нүүрсхүчлийн хий)
бүхий дулаан тогтоогуурт 96 цаг түүнээс цааш хугацаанд өсгөвөрлөж өдөр бүр
ургалтыг гэрлийн микроскопын 4Х10 өсгөлтөөр харж тодорхойлов.
3.3. Молекул биологийн арга
3.3.1. Trizol- оор ДНХ ялгах
Дээж (бүрэн өсгөвөрлөгдсөн өсгөвөр)-ээс1.5 мл-ийг тубенд (tube) хийж
15000 эрг/мин-д 10 мин эргүүлэв. Шингэн хэсгийг асгаж /соруулж/ 100 мкл ариун
давхар нэрмэл ус хийн задартал нь сэгсрэгч (vortex) дээр зайлав. Түүний дараа
1мл Тризол /Trizol/ нэмж зөөлөн сэгсрээд 3 минут өрөөний хэмд тавина.
Хугацаа дууссаны 0.3 мл хлорформ нэмж 15 секунд сэгсэрч 2-3 минут тавиад
10000 эрг/мин-д 10 минут эргүүлсэн. Хуруу шилэнд шингэний 3 үечлэл үүсгэсэн
байв. Хамгийн дээд талын шингэний үечлэлийг соруулан авч асгаад үлдсэн
шингэн дээр 0.3 мл изопропил (isopropyl) (100% ethanol per 1ml) нэмж 20
секундын турш хольж 2-3 минут өрөөний хэмд тавьсны дараа 5000 эрг/мин-д 5
минут эргүүлэн хурилдуулав. Түүний дараа дээд шингэнийг (supernatant)
соруулан авч асгаад үлдсэн тунадас (pellet) дээр сайтар холин 15 минутын турш
өрөөний хэмд сэгсэрсэний дараа 5000 эрг/мин-д 5 минут эргүүлэв. Түүний дараа
дахин 1 мл-ийн 0.1M sodium citrate нэмж хурилдуулах хүртэл давтав.
Хурилдуулж тунасан тунадас дээр /pellet/ 1.5 ml 75%-ийн этанол нэмж
өрөөний хэмд 15 минут байлгаад 3 минут тутам хольж сэгсрээд 5000 эрг/мин-д 5
минут эргүүлэв. Сүүлд нь дээд шингэнийг соруулж асгаад pellet-ээ 3-4 минут 37
хэмийн дулаан тогтоогуурт тавьж хатаагаад 100 μl ариун нэрмэл ус хийж
дараагийн туршилт хүртэл - 20 хэмд хадгалав.
3.3.2. ПГУ (полимеразын гинжин урвал) тавих
Гарган авсан үүсгэгчийн хэвшлийг Peyraud A, Woubit S,…et.al, 2003 Greco
G, Corrente M et.al. 2001 нарын боловсруулсан аргын AG -1, AG -2,
MAGAUVRC1-L, MAGAUVRC1-R. праймер бүхий multiplex ПГУ (полимеразын
гинжин урвал)-ыг тус тус тавьж тодорхойлов. (5, 6 дугаар хүснэгт)
Гомбосүрэнгийн Өлзийсайхан 25
