Page 19 - Isolasi Pemurnian dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavanoid

dikumpulkan sesuai fraksi-fraksinya. Fraksi-fraksi dapat dikumpulkan secara otomatis oleh
pengumpul fraksi. Produktivitas kromatografi dapat ditingkatkan dengan menjalankan

beberapa kolom sekaligus. Di sini, diperlukan pengumpul multi aliran. Komposisi aliran

eluen dapat dimonitor dan masing-masing fraksi dianalisis senyawa terlarutnya, misalnya
dengan kromatografi, absorpsi sinar UV atau fluoresensi. Senyawa berwarna (atau senyawa

berfluoresensi di bawah lampu UV) dapat terlihat di dalam kolom sebagai pita-pita bergerak.
Langkah – Langkah dalam pemisahan dengan teknik kromatografi kolom :

1. Pemilihan Fasa Gerak dan Fasa Diam.

Hal pertama yang harus dilakukan dan dipersiapkan pada kromatografi kolom yaitu
pemilihan fasa diam dan fasa gerak. Tahapan awal ini sangat menentukan hasil akhir

dari proses kromatografi kolom. Sebab pemiliihan fasa diam dan fasa gerak sangat
berpengaruh ketika pemisahan komponen. Pemilihan fasa gerak dan fasa diam

didasarkan pada kepolaran zat yang akan dipisahkan. Biasanya fasa diam digunakan
bersifat polar seperti halnya pasir silika gel. Sementara itu, fasa gerak atau eluen

umumnya dilakukan variasi kepolaran untuk menghasilkan pemisahan yang paling

optimal. Dalam menjalankan proses kromatografi yang baik, dilakukan eluen dari yang
bersifat non polar ke polar, dan sebaliknya polar dan non polar.

2. Packing Kolom
Tahapan ini merupakan persiapan dari tahapan kolom, dimana tahapan ini digunakan

untuk mempersiapkan kolom dalam fasa diamnya. Tahapan packing kolom terbagi

dalam dua macam cara, yaitu cara kering dan basah. Packing kolom pertama dengan
cara kering dilakukan dendan memasukkan fasa diam yang menyerupai pasir silika gel

ke dalam kolom langsung sampai penuh. Kemudian diikuti dengan memaskukkan
eluen sampai menutupi fasa diam. Sedangkan pada cara basah, pasir silika atau fasa

diam dicampurkan lebih dulu dengan eluen pada wadah terpisah, kemudiancampuran

tersebut dimasukkan ke dalam kolom dengan cara bersamaan
3. Elusi

Tahapan terakhir dari kromatografi kolom dikenal dengan nama elusi. Proses ini
mengalirkan campuran melalui fasa diam pada kolom menggunakan eluen atau fasa

gerak. Hasilnya adalah pemisahan komponen campuran dari fasa diam.

Isolasi Pemurnian dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavanoid 19