Page 20 - Isolasi Pemurnian dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavanoid

Pemisahan komponen pada keseluruhan proses kromatografi kolom seperti pada
prinsipnya didasarkan pada sifat kepolaran, ukuran, dan berat molekul yang

dipisahkan. Hasil dari elusi akan ditampung pada wadah terpisah pada setiap fraksi.

Elusi dapat dilihat dari perbedaan warna yang dihasilkan oleh setiap komponen.
Misalnya senyawa A terpisah menghasilkan warna hijau, dan pada komponen B

menghasilkan warna merah.
3.3.2 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan untuk preparative atau memisahkan

senyawa – senyawa dalam jumlah kecil. KLT menghasilkan pemisahan yang lebih baik
dibandingkan dengan kromatografi kolom dan lebih efisien karena waktu yang dibutuhkan

lebih cepat.
Kromatografi lapisan tipis (KLT) adalah suatu teknik kromatografi yang digunakan

untuk memisahkan campuran yang tidak volatile. Kromatografi lapisan tipisdilakukan pada
selembar kaca, plastik, atau aluminium foil yang dilapisi dengan lapisan tipis

bahan adsorben, biasanya silika gel, aluminium oksida, atau selulosa. Lapisan tipis adsorben

diketahui sebagai fasa stasioner (atau fasa diam). Setelah sampel diaplikasikan pada pelat,
suatu pelarut atau campuran pelarut (dikenal sebagai fasa gerak) dialirkan ke atas melalui

pelat berdasarkan gaya kapilaritas. Oleh karena analit yang berbeda mengalir menaiki pelat
KLT dengan laju yang berbeda, maka terjadilah pemisahan komponen dalam analit tersebut.

Kromatografi lapisan tipis dapat digunakan untuk memonitor pergerakan reaksi,

mengidentifikasi senyawa yang terdapat di dalam campuran, dan menentukan kemurnian
bahan.

Langkah – Langkah untuk melakukan kromatografi lapisan tipis sebagai berikut:

 Sejumlah kecil spot larutan yang mengandung sampel diaplikasikan pada pelat, sekitar
1,5 cm dari dasar pelat. Pelarut sampel diuapkan hingga habis, karena dapat

mengganggu pemisahan. Jika digunakan pelarut yang tidak volatil untuk melarutkan
sampel, pelat harus dikeringkan dalam bejana vakum.

 Sejumlah kecil pelarut yang sesuai (eluen) dituangkan ke dalam gelas piala atau wadah
transparan yang sesuai dengan kedalaman paling tinggi 1 cm. Selembar kertas saring

diletakkan ke dalam bejana sehingga dasarnya menyentuh pelarut dan kertas bersandar

Isolasi Pemurnian dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavanoid 20