Page 510 - Traité de Chimie Thérapeutique 4 Médicaments en relation avec des systèmes hormonaux

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clomifène
La quantification se fait par mesure de la surface relative de deux signaux (intégra­
tion), l'un appartenant, par exemple, à la substance à doser, l'autre, à une substance
étalon.
Une application immédiate est la mesure de la composition d'un mélange d'iso­
mères.
Ainsi, le clomifène est un mélange de deux isomères Z et E. D'après la BP et l'USP,
la quantité d'isomère Z doit varier dans l'intervalle 30 à 50 %.
Le rapport Z/E peut être mesuré directement par le rapport des intégrations des
signaux du groupement méthylène lié à l'atome d'oxygène : ceux-ci apparaissent
sous forme d'un triplet à 4,11 ppm pour l'isomère Z et 3,98 ppm pour l'isomère E.
Cette méthode ne peut être appliquée directement à la mesure du rapport ZIE du
tamoxifène : en effet, l'isomère Z (principe actif) doit représenter au moins 99 % du
mélange Z + E (BP et USP) et les méthodes d'intégration ne permettent pas de com­
parer avec précision des valeurs qui sont dans le rapport 1/100 (= E/Z + E).
Il est donc nécessaire de comparer le signal de l'isomère minoritaire E à un signal
d'intensité voisine, appartenant à l'isomère majoritaire Z : ce ne peut être qu'un signal
lié à l'abondance naturelle en 13C (1,1 %) : en effet, le 13C, qui possède un spin égal à
1/2, présente un couplage avec les noyaux d'hydrogène et donne des signaux secon­
daires, de faible intensité, qui sont indétectables dans un enregistrement classique.
Leur surface totale est 1,1 % de la surface des signaux principaux.
Pour le tamoxifène ce sont à nouveau les protons oxyméthyléniques qui répondent
à cette exigence et peuvent être utilisés pour les mesures (figure 5). Dans un enregis­
trement normal, ces protons apparaissent, pour l'isomère majoritaire Z, sous forme
d'un triplet A (^h.h = 6 Hz) centré à 3,85 ppm (ligne a).
L'utilisation de la transformée de Fourier permet d'améliorer le rapport signal/bruit
et donc de détecter les signaux de faible intensité. Parmi ceux-ci, ceux dus au cou­
plage avec le carbone : ils apparaissent sous forme d'un doublet de triplets avec une
grande constante (1JH.C = 140 Hz) et une petite constante (^h.h = 6 Hz), ce qui fait
(ligne b) que le signal principal A apparaît entouré de deux triplets satellites B et G, à
3,61 et 4,08 ppm.
Pour l'isomère E, le groupement oxyméthylénique apparaît sous forme d'un triplet
A' à 4,01 ppm (ligne c), qui est l'équivalent du signal A (les satellites B' et C' ne sont
pas figurés).
Ainsi, pour un mélange de composés Z et E (ligne d) la proportion Z/E peut être
directement déduite de l'intégration hB et hA, des signaux B et A', par la formule
E/Z = hA./hB x 5,5 x 10’3 (c'est en effet la somme des aires de B et C qui est égale à
11 x 10‘3 x l'aire du signal principal).
Ainsi, des teneurs de l'ordre de 0,5 % d'impureté E dans le principe actif ou dans
des préparations pharmaceutiques ont pu être déterminées.