Page 31 - Адууны ям өвчний тандалт, үүсгэгчийн молекул биологийн судалгаа

Агароз гель электрофорез явуулах арга зүй

Электрофорез явуулахад шаардагдах агароз гель бэлтгэх.
- 1%-ын агарозын гель найруулах: 40 мл 1X TAE буферийн уусмалд 0,4 гр
о
агароз нэмээд 100 С буцалган уусгана.
О
О
- 50 -60 С хүртэл хөргөөд этидиум бромид 2 мкл нэмээд гелын саванд
шүдийг хийж царцаана. Гель царцасны дараа самыг сугалж авна.
- Гелийг электрофорезын аппаратанд байрлуулж 1X TAE буферын уусмал

гелийг далд ортол хийнэ.

- Парафилм цаасан дээр gel loading 1 мкл дусааж 5 мкл ПГУ холимогоос нэмж
сайтар холин гелийн нүхэнд хийнэ.

- Электрофорезын аппаратыг асаан 100 вольтонд 20 мин гүйлгэнэ. Дараа нь
аппаратнаас гелиэ аваад транслуминатор буюу хэт ягаан туяаны аппаратан

(хэт ягаан туяа 250 нм урттай) дээр тавиад урвалын дүнг уншиж зургаар
баталгаажуулна.

3.4.3 Агороз гелээс ДНХ цэвэршүүлэн ялгах арга зүй

Агароз гелиэс ДНХ-г Thermo Scientific кампанийн гель цэвэршүүлэх цомгийг

ашиглан дараах протоколын дагуу бэлдэнэ.
Хэрэглэгдэхүүн: Эфендорф тюбе, электрон жин, транслюминатор, хутга, агароз

гелээс ДНХ цэвэршүүлэх кит, усан банн, центрифуг
Арга зүй:

- Эфендорф тюбений хэмжээг мянганы нарийвчлалтайгаар жигнэж, хэмжээг
тэмдэглэнэ.(1)

- ДНХ гүйлгэсэн агароз гелийг транслюминатор дээр тавин ДНХ-д хамгийн ойр

байхаар (band)-г хутгаар тойруулж зүснэ.
- ДНХ агуулсан агароз гелийг жинлэсэн тюбенд хувааж хийн ахин жинлэж

мянганы нарийвчлалтай хэмжээг тэмдэглэж авна.(3)
- Үүний дараа (3)-аас (1)-ийг хасвал ДНХ агуулсан агароз гельний цэвэр жин

гарна.

- Цэвэр жинг гаргасны дараа цомгийн зааврын дагуу Binding Buffer (BB) хийж
0
58 С-ийн усан баннанд 10-15 мин (бүрэн уустал) байлгана. Хэд хэдэн
минутын зайтай хольж өгөх хэрэгтэй.
- Днх бүхий Binding Buffer-ийг тусгай тюбэнд (шүүлтүүртэй) хийн 13000 эрг/мин

1 мин центрифугдэнэ. Доод шингэнийг асгана. Энэ үйлдлийг дээжийг

дуустал хийж гүйцэтгэнэ.

26