Page 29 - Адууны ям өвчний тандалт, үүсгэгчийн молекул биологийн судалгаа

3.4 Молекул биологийн судалгааны арга зүй

3.4.1 Геномын ДНХ ялгах арга зүй
Бактерийн өсгөвөрөөс БНСУ-ын INtRON кампанийн геномын ДНХ ялгах

цомгийг ашиглан дараах арга зүйн дагуу ялгаж авав.
Хэрэглэгдэхүүн: 70% этанол, изопропонол, ариутгасан нэрмэл ус, эфендорфын

тюбе, центрифуг, вортекс, пепитка, хошуу.
Арга зүй:

- Эс цуглуулах шат. Үүнд: Шингэн тэжээлд ургуулсан бактерийн өсгөвөрөөс

микро тюбэнд хийж 13000 эрг/мин-аар 1 минут центрифугдэнэ.(хэд хэд

давтана)
- Дээд шингэнийг асгана, үлдсэн шингэнд тунасан эсийг вортекс хийж

уусгана.
- Эсийн хана эвдлэх шат. Үүнд: эс задлагч уусмал /cell lysis buf/ 300 мкл

нэмээд эсийг сайн уустал нь вортексдоно.
0
- 1,5 мкл РНХ салгах уусмал /RNAse/ хийж 37 С-т 15-30 мин байлгана.
- Дээжийг өрөөний температур хүртэл хөргөөд 100 мкл PPT buf нэмж

холигчин дээр 20 сек холино.
- Үүнийгээ 13000 эрг/мин-аар 3-5 мин центрифугдэн дээдэх шингэн хэсгийг

аван шинэ тюбэнд хийнэ.

- 100% изопропонол 1:1 хэмжээтэй хийнэ.
- 13000 эрг/мин-д 1 мин центрифундэнэ. ДНХ ѐроолд нь жижиг цагаан

тунадас байдлаар харагдана.
- Шингэнийг асгаад 70% этанол хийж угаана. 13000 эрг/мин-д 1 мин

центрифугдэн болгоомжтой этанолыг асгана.
- Тюбээ цэвэр цагаан цаасан дээр доош харуулж тавин агаарын

температурт 10-15 хатаасны дараа 50-150 мкл DNA Rehydration buffer
0
0
хийн 65 С-т 30-60 минут эсвэл 4 С-т хонуулж ДНХ-г уусмалд уусгана.
- Ялгаж авсан ДНХ-ийн концентраци болон цэвэршилтийг

спектрофотометрийн 260-280 нт-т шалгасны дараа урт хугацаанд
0
0
хадгалах бол -80 С-т энгийн хадгалалт -20 С-ийн хөргөгчинд хадгална.

24