Page 28 - Буурны дагзны булчирхайн шүүрлийн химийн найрлага, бохирдлын судалгаа

Б.Хоролмаа “Буурны дагзны булчирхайн шүүрлийн химийн найрлага,
бохирдлын судалгаа”

 Метилтестостероны стандарт уусмалууд (2, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 ба 0

нг/мл) (хэрэглэхэд бэлэн)
 Peroxidase conjugated methyltestosterone

 Анти-метилтестостероны эсрэг бием

 18 мл өнгө төрүүлэгч уусмал
 50 мл шингэрүүлэх буфер ph=7.4

 6 мл зогсоох уусмал (1.8 N H2SO4) (хэрэглэхэд бэлэн)

 50 мл зайлах / угаах уусмал
Фермент холбох эсрэг биемийн урвалын арга ажиллагаа / Шинжилгээний явц

1. Нүхнүүдээ дугаарлаж байрлуулна.

2. 150 мкл шингэрүүлэх буфер, стандартууд тус бүр 50 мкл –г хийж өгнө
3. 50 мкл дээж уусмалаа хийнэ

4. 100 мкл шингэрүүлсэн enzyme conjugate нэмнэ.
5. 100 мкл шингэрүүлж бэлтгэсэн метилтестостероны эсрэгбием хийнэ.

0
6. Нэг минут сайтар хольж, +4 C-т 2 цаг тавина.
7. 300 мкл зайлах уусмалаар 3 удаа зайлж асгана.

8. 150 мкл өнгө төрүүлэгч уусмал хийж, тасалгааны температурт харанхуй

нөхцөлд 30 минут холино. Хөх өнгө өгсөн байна.
9. Бичил нүх бүрт 50 мкл зогсоох уусмал хийнэ. Ингэхэд хөх өнгө нь шар

өнгө болж хувирдаг.
10. 30 минутын дотор Спектрофотометр /elisa уншигч/ ашиглан 450 нм

долгионы уртад гэрлийн шингээлтийг тодорхойлов (6 дугаар гэрэл зураг).

3.2.8. Нийт тестостероны төвшрүүлэгийг өндөр мэдрэмжит шингэний

хроматографи (HPLC)-ийн багаж ашиглан тодорхойлсон нь

Нийт тестостерон дааврын төвшрүүлэгийг Morgan, et al (1998)-ын аргаар [9]

тестостероны аналитик стандарт (Fluka, 86500-1g, ≥99.0%) бодистой
харьцуулан өндөр мэдрэмжит шингэний хроматографи (ӨМШХ/HPLC)-ийн

багаж ашиглан 241 нм долгионы уртад хэмжиж тодорхойлов. Тестостероны

аналитик стандарт бодисыг Sigma Aldrich-аас худалдан авсан болно. ӨМШХ-ийн
багажид Zorbax Argilent-С18 (150 mm X 4.6 mm) колонк сонгон, хөдөлгөөнт

фазад ацетонитрил : давхар нэрмэл усны /55% : 45 %/ уусгагчийн системийг
0.45 мкм мембран шүүлтүүрээр шүүж хийгүйжүүлэн урсгалын хурдыг нэг

28