Page 135 - TOKSOPLASMOSIS-pada-Hewan

struktur awal dimulainya siklik amplifikasi dalam reaksi L-AMP.

Tabel 3. Konsentrasi Masing-Masing Bahan dalam Reaksi
L-AMP
Konsentrasi Volume
No. Bahan (Reagen)
Reaksi Reaksi (µL)
1. Betain (5M) 0,6 M 3
2. MgSO4 (150 mM) 6 mM 1
3. dNTP mix (10 mM) 1,4 mM 3,5
4. Buffer bst thermopol (10x) 1 x reaksi 2,5
5. FIP (50 µM) 2 µM 1
6. BIP (50 µM) 2 µM 1
7. F3 (5 µM) 0,2 µM 1
8. B3 (5 µM) 0,2 µM 1
9. LF (25 µM) 1 µM 1
10. LB (25 µM) 1 µM 1
11. Template 2
12. Bst Polymerase (8000 U/mL) 8 U 1
13. H O*, nuclease free
2
Total volume reaksi 25
Keterangan: *) ditambahkan hinga volume total 25 µL

Tahap perbanyakan. Tahap ini disebut dengan tahap siklik,
karena terjadi reaksi yang berulang untuk perbanyakan struktur
awal yang dihasilkan pada tahap non siklik. Tahap siklik (Gambar
3) dimulai dengan perubahan secara cepat dari struktur awal “bumb-

bell structure” menjadi tangkai loop DNA (stem loop DNA). Primer
FIP akan menempel pada daerah untai tunggal dari tangkai loop
DNA, terjadi sintesis dan pelepasan hasil sintesis, serta pemisahan
DNA untai ganda. Pelepasan untai tunggal dari struktur tangkai
loop terjadi karena penempelan pada daerah B1c dan B1, selanjutnya
ujung 3’ pada daerah B1 akan memulai sintesis dengan menggunakan
struktur tersebut sebagai cetakan dan melepaskan untai DNA yang
komplementer dengan FIP, juga akan dihasilkan bentuk “dumb-
bell structure” dimana pada kedua ujungnya mempunyai daerah F1-

F1c dan B1c-B1, struktur ini hanya kebalikan dari struktur yang
126 Toksoplasmosis pada Hewan