Page 424 - Traité de Chimie Thérapeutique 2 : Médicaments Antibiotiques

414 MÉDICAMENTS ANTIBIOTIQUES

b) Réduction du groupe NO, par le zinc en milieu chlorhydrique avec forma-
tion d'une amine primaire aromatique qui peut être dosée de deux manières dit-
férentes:
- dosage par diazotation par le nitrite de sodium ;
dosage par bromation.
c) Après hydrolyse chlorhydrique et élimination de l'acide dichloracétique formé,
dosage anhydrotitrimétrique par l'acide perchlorique.
d) Dosage anhydrotitrimétrique de la fonction amide dans le diméthylforma-
mide par le méthylate de sodium en présence de nitro-2 aniline comme indicateur.

5.3.3. Méthodes biologiques

• Méthodes micro-biologiques
On compare l'inhibition provoquée sur la croissance de bactéries par des con-
centrations connues de l'antibiotique à examiner et celle d'une substance de réfé-
rence. On peut employer deux méthodes: méthode turbidimétrique ; méthode
par diffusion. Les germes utilisés sont variés. Escherichia coli, Klebsiella pneu-
moniae, Beneckea natriegens, Sarcina lutea, Bacillus subtilis.

• Méthode radio-enzymatique
On utilise pour ce dosage une enzyme : la chloramphénicol-acétyl-transférase pro-
venant d'un mutant d'Escherichia coli. Seul le chloramphénicol actif est fixé par
cette enzyme. Après acétylation par l'acétyl-CoA marqué au "c en présence de
chloramphénicol-acétyltransférase, le chloramphénicol acétylé marqué au "C est
dosé par comptage par scintillation.

NB : Les Pharmacopées française et britannique préconisent le dosage par spectrophotométrie
ultra-violette ; la Pharmacopée américaine indique un dosage microbiologique sur Escherichia
coll par la méthode turbidimétrique.

6. RELATIONS STRUCTURE-ACTIVITÉ

les différents travaux relatifs aux relations structure-activité font apparaitre pour
la molécule de chloramphénicol trois sites essentiels :
le cycle aromatique ;
la chaine aminopropanediol ;
- la chaine dichloroacétyle