Page 23 - Адууны томуу өвчний тандан судалгаа, үүсгэгчийн ялган авч тодорхойлсон нь

Ё. Мягмарсүх “Адууны томуу өвчний тандан судалгаа, үүсгэгчийг ялган авч тодорхойлсон нь”

3.5. Урвуу Транскриптаз - Полимеразын гинжин урвал

Ortomixoviridae-язгуурын Ortomixovirus-ууд РНХ агуулдаг учир оношлохын
тулд УТ-ПГУ-аар шалгаж баталгаажуулна [28]. Полимеразын гинжин урвал нь

амьд организм дахь дезоксирибонуклейн хүчлийн репликацийн зарчимд
тулгуурлан, лабораторийн нөхцөлд ДНХ-ийн тодорхой хэсгийг олшруулах процесс

юм. Эхлээд ялган авсан РНХ-ийг Урвуу Транскриптаз (УТ) энзим iScript TM (Bio-rad,
Hercules, CA), рандом праймер (ThermoScript™ RT-PCR System) ашиглан РНХ-

ээс кДНХ болгон хувиргах УТ-ПГУ-ыг арга зүйн дагуу [29] явуулсан. Дараа нь АНУ-

ын CDC-ийн зөвлөмжийн дагуу [39] томуугийн вирусын А хэвшлийн М уургийг
тодорхойлох (M30F2 5-'ATGAGYCTTYTAACCGAGGTCGAAACG-3' болон M264R3

5'-GGACAAANCGTCTACGCTGCAG-3') хос праймер тус бүрээс 1 мкл, SuperScript®

III Reverse Transcriptase (Invitrogen, Carlsbad, CA) полимераз энзимийн 10x buffer-
ээс 4 мкл, dNTP-ээс 2 мкл, цэвэршүүлсэн уснаас 14.9 мкл, дээжнээс 2 мкл-ыг тус

тус хийж 94°C -д 1 минут халаах, 94°C -д 20 секунд 53°C -д 30 секунд 72°C -д 2
минутаар, 72°C -д 5 минутаар нийлэгжүүлж 35 удаагийн давтамжтайгаар праймер

холбогдох, 4°C -д 10 минут уртасгах зарчмаар GeneAmp PCR System 9700 (Applied
Biosystem, USA) термоциклер ашиглан УХ-ПГУ-ыг явуулсны дараа эцсийн

бүтээгдэхүүнийг 1,5%-ийн агорозын гель, ТАЕ буферт гүйлгэж, этидиум бромидээр

будан трансиллюминаторт харж, үр дүнг уншив (5- 6-р хүснэгтийн дагуу).

Урвуу транскриптаз-полимеразын гинжин урвалд хэрэглэгдэх
энзим, урвалжийн, хэмжээ
5-р хүснэгт
кДНХ болгох (УХ) холимог ПГУ-ын холимог

5 х буфер (iScript ) (4.0 мкл) 10 х буфер (SuperScript®) (4.0 мкл)
TM
TM
dNTP (iScript ) (3.0 мкл) dNTP mix (SuperScript®) (2.0 мкл)
TM
RNase inhibitor (iScript ) (1.0 мкл) Taq (SuperScript®) (0.2 мкл)
TM
УТ энзим (iScript ) (1.0 мкл) M30F2 праймер (1.0 мкл)
Рандом праймер (ThermoScript™) (1.0 мкл) M264R3 праймер (1.0 мкл)

Нийт хэмжээ 10 мкл кДНХ (2.0 мкл)
Цэвэршүүлсэн ус (14.8 мкл)

Нийт хэмжээ 25.0 мкл

19