Page 22 - Адууны томуу өвчний тандан судалгаа, үүсгэгчийн ялган авч тодорхойлсон нь
P. 22
Ё. Мягмарсүх “Адууны томуу өвчний тандан судалгаа, үүсгэгчийг ялган авч тодорхойлсон нь”
3.4. Вирусын РНХ ялгах
QIAGEN цомог ашиглан РНХ молекул ялгах арга зүй
Адууны томуугийн үүсгэгчийг ялган авахийн тулд хамрын арчдасанд
боловсруулалт хийж 1 мл ариун ус хийж гомогенизацлаад 8000 эрг/мин (rpm)
эргэлттэй центрифугээр 3 минут центрифугдэнэ. Шингэн фазын хэсгээс 100 мкл-
ийг авч шинэ цодонд шилжүүлэн дээр нь 450 мкл задлагч уусмалаас хийж 10
секунт холиод, тасалгааны температурт 15 минут байлгана [39].
Дараа нь холбогч уусмалаас 600 мкл нэмж зөөлөн холино. Шинэ цодонд
шүүлтүүрээ байрлуулж дээжнээс 650 мкл хийж шүүнэ. 12000 эрг/мин эргэлттэй
центрифугээр 1 минут эргүүлж тунаж үлдсэн шүүлтүүртэй хэсгийг авч шинэ цодонд
шилжүүлнэ [39].
Шүүгдсэн хэсэг 500 мкл угаагч уусмалаас хийж 12000 эрг/мин эргэлттэй
центрифугээр 1 минут центрифугдэж, угаагч уусмалыг 650 мкл-ээр хийнэ, энэ
үйлдлийг давтана. Шүүгдсэн хэсгийг шинэ цодонд шилжүүлж 14000 эрг/мин
эргэлттэй центрифугээр 2 минут центрифугдэнэ. Улмаар 60-100 мкл ариун ус хийж
тасалгааны температурт 2 минут байлгана. Ялган авсан вирусын РНХ-ийг хэрэглэх
о
хүртэл -80 С -д хадгална [39, 40, 41].
900 мкл Физ.ус+
100 мкл дээж
Зураг 7. QIAGEN цомог ашиглан РНХ ялгах арга зүй
18
