Page 411 - Traité de Chimie Thérapeutique 4 Médicaments en relation avec des systèmes hormonaux

372 MEDICAMENTS EN RELA DON A VEC DES 5} STÊMES HORMONA UX

Figure 21 : Couplage de fragments. Des fragments de petite taille (1 à 4) sont prépa­
rés et purifiés avant d'être couplés les uns aux autres pour accéder aux
longs peptides

6. PURIFICATION - CONTRÔLE

Quel que soit le soin apporté aux étapes de synthèse, il est inévitable que le produit
final, après déprotection de ses chaînes latérales soit contaminé par des impuretés.
Celles ci pourront avoir des origines différentes qui dépendront en grande partie de la
stratégie de synthèse utilisée. Les peptides à délétion (issus de l’incorporation incom­
plète d'un acide aminé lors d'un couplage difficile) constituent un contaminant fré­
quent des peptides préparés sur support solide. Les diastéréoisomères issus de la
racémisation d'un amino-acide sont, par contre, plus à redouter quand l'assemblage
de la chaîne peptidique s'est fait par couplage de fragments.
Enfin, les réactions secondaires souvent observées au moment de la déprotection
finale seront la source de peptides comportant des modifications au niveau de
chaînes latérales sensibles.
Le point commun à ces différentes impuretés est d'être de structure extrêmement
proche de celle du peptide souhaité, ce qui rend leur mise en évidence et leur élimina­
tion d'autant plus difficiles. Ce problème est particulièrement important quand la syn­
thèse a été effectuée sur support solide puisque aucune purification intermédiaire
n'aura été possible.

6.1. PURIFICATION
Les méthodes de purification doivent être adaptées aux caractéristiques physico-chi­
miques des peptides qui sont généralement solubles en milieu aqueux et non dans les
solvants organiques. Les techniques employées habituellement sont les suivantes :
- La gel-filtration, qui permet de séparer les molécules en fonction de leur taille, est
particulièrement adaptée à l'élimination des peptides comportant des délétions,
dont la taille est inférieure à celle du peptide désiré.
- La chromatographie d’échange ionique permet de séparer les molécules en fonc­
tion de leur point isoélectrique. Elle est adaptée à la séparation de peptides modi­
fiés au niveau (ou à proximité) d'une chaîne latérale ionisable.
- La chromatographie en phase inverse : l'apparition de gels de silice greffés au
moyen de chaînes hydrophobes et des techniques de chromatographie haute pres­
sion a permis d'atteindre des performances telles que cette méthode s’est progres­
sivement imposée pour la purification des peptides. La séparation s'effectue princi­
palement en fonction des différences de caractère hydrophobe des molécules.
Cette méthode permet de séparer des peptides comportant des délétions ainsi que
ceux dont les chaînes latérales ont été modifiées.