Page 73 - Traité de Chimie Thérapeutique 4 Médicaments en relation avec des systèmes hormonaux

34 MÉDICAMENTS EN RELA DON A VEC DES SYSTÈMES HORMONA US

la fois par leur origine, leur mode de préparation et leur degré de pureté, d'autre part,
l'effet hypo-uricémiant était trop faible et trop passager pour une utilisation thérapeu­
tique. Depuis les travaux de Laboureur et Langlois en 1968, il est possible de produire
en grandes quantités une urate-oxydase très pure et très active à partir de cultures
d'une souche d'Aspergillus flavus.

2.3.1. Production de l'enzyme
Il existe deux procédés d'obtention.
2.3.1.1. PAR PROCESSUS FERMENTAIRE
Microorganisme producteur
La souche utilisée a été sélectionnée à partir de sols, par culture et enrichissement en
présence d'acide urique ; il s'agit d'Aspergillus flavus Link (Souche n° 624).
Cultures
- Préculture sur riz malté d'une suspension de conidies provenant d'une culture sur
milieu de Sabouraud gelosé.
- Culture intermédiaire : à partir de la culture sur riz malté, on ensemence un fermen-
teur de 3 litres avec la suspension conidienne obtenue par reprise avec de l'eau
stérile, sur milieu glucosé.
- Culture de production : on ensemence un fermenteur de 100 litres avec la culture
précédente sur le même milieu enrichi d'acide urique. La culture est suivie par des
dosages effectués sur des extraits mycéliens.
Extraction
Le mycélium, recueilli par filtration, lavé à l'eau distillée est congelé, puis broyé. Le
broyât est repris par de l'eau ammoniacale à pH 9,5, additionné de chloramphénicol
et d'EDTA pour éviter la pollution. Après filtration, l'extrait recueilli est concentré sous
pression réduite. Après plusieurs précipitations suivies de centrifugations, on obtient
un insoluble inactif et un surnageant, qui est fractionné sur colonne de Sephadex. Les
fractions actives sont réunies et lyophilisées.
Purification
L'urate-oxydase est purifiée par deux chromatographies successives, une sur cellu­
lose, l'autre sur gel de Sephadex G 100.
2.3.1.2. PAR BIOTECHNOLOGIE
L'urate oxydase peut être produite par un procédé à ADN recombinant.
2.3.2. Caractéristiques de l'enzyme
Pureté : le produit hautement purifié obtenu par chromatographie ne donne qu'un
seul pic symétrique. Par électrophorèse sur papier, à pH 7,8, 8,6 et 10,2 et par élec­
trophorèse sur polyacrylamide à pH 8,5 et 9,5, et après coloration au Noir Amido
12 BN, une seule bande est observée.
Masse relative : 93.000 ± 3000 Daltons.
Solubilité : l'urate-oxydase est peu soluble dans l'eau ; sa solubilité augmente avec
l'alcalinité. En milieu acide, elle est insoluble et se dénature. Elle est insoluble égale­