Page 74 - Traité de Chimie Thérapeutique 4 Médicaments en relation avec des systèmes hormonaux

1 MÉDICAMENTS DES HYPERURICÉMIES ET DE LA GOUTTE 35

ment dans la plupart des solvants organiques et dans les solutions salines concen­
trées.
Point isoélectrique : 6,2 ±0,1
Composition en amino-acides
Tableau 4
Amino-acides % du poids sec Amino-acides % du poids sec
Lys 8,55 Ala 3,39
His 4,11 Cys 0,76
Arg 5,08 Val 6,52
Asp 11,42 Met 1,13
Thr 6,6 Ile 5,05
Ser 5,84 Leu 6,67
Glu 12 Tyr 4,35
Pro 2,59 Phe 4,35
Gly 2,34
Remarque : La masse relative du produit purifié est connue avec précision, de même
qu'une impureté qui a été identifiée, par méthode LC-MS par électrospray.
Activité enzymatique
On détermine l'activité enzymatique par spectrophotométrie en mesurant la consom­
mation de substrat. La constante de Michaelis est de 6.1 O^M. L’unité d'activité est la
quantité d’enzyme capable d'oxyder 0,05 mg d'acide en 10 min à 30°C et à pH 8,5.
Effecteurs
• Les cations alcalins et alcalino-terreux ont peu d'action sur l'activité de l’urate-
oxydase. L’enzyme est également peu sensible aux ions Cr+++ et Cu++ (différence
avec les enzymes d'origine animale) ; elle montre une sensibilité plus grande aux ions
,
Co++, Ni Fe+++, Al*** Mn++, Pb++ et Zn++ ; enfin l'urate-oxydase est extrêmement
**
,
sensible à l’ion Hg++.
• Les anions sont inactifs : seul l'ion ON-, puissant inhibiteur, modifie l'activité de
l’urate-oxydase ; certains anions sont légèrement activateurs à forte concentration :
PO4- - " et CH3COO-.
2.2.3. Contrôle
Détermination de la pureté par électrophorèse sur papier et électrophorèse verticale
sur gel de polyacrylamide.
Dosage de l'activité enzymatique, par mesure de la consommation d'acide urique
en spectrophotométrie à 285 nm.
Détermination du point isoélectrique : on mesure la non-mobilité de l'urate-oxydase
par électrophorèse sur papier, en fonction des variations de pH, à voltage et à force
ionique constants.
Détermination de la masse relative par chromatographie sur gel de Sephadex.
Dosage des protéines selon la méthode du microbiuret de Goa ou par la méthode de
Lowry, en utilisant comme protéine étalon la sérum-albumine bovine. La teneur en
protéines totales devra être inférieure à 3,5 mg pour 1 000 unités d'activité urate-oxy-
dase.