Page 714 - Traité de Chimie Thérapeutique 4 Médicaments en relation avec des systèmes hormonaux

17. MÉDICAMENTS DU MÉTABOLISME PHOSPHOCALCIQUE 675

8. CONTRÔLE ANALYTIQUE

8.1. CALCITONINE SYNTHÉTIQUE DE SAUMON

Les essais figurent dans diverses pharmacopées, notamment la Pharmacopée euro­
péenne (2e ed.) et la Pharmacopée française (10e ed.).

8.1.1. L'identification

Elle fait appel à la vérification de la composition en acides aminés à l'aide d’un analy­
seur qui ne doit pas mettre en évidence d'acides aminés caractéristiques d'autres cal­
citonines (alanine, méthionine, phénylalanine, tryptophane) et donner des proportions
compatibles avec la structure de ce produit. Par ailleurs, on vérifie l'identité par CCM
avec un produit de référence, et l'activité hypocalcémiante chez le rat.

8.1.2. Les essais de pureté

Ils comportent :
- une mesure d'absorbance à 275 nm,
- le dosage par CGL de l'acide acétique avec une limite de 15 p.100 et de l'eau avec
une limite de 10 p.100, le total des deux ne dépassant pas 20 p.100,
- la vérification de la composition en acides aminés comme pour l'identification,
- l'estimation des substances apparentées (peptides parasites), d'une part par CCM
sur plaque de cellulose, d'autre part par électrophorèse de zone,
- la teneur en peptide total par calcul à partir du résultat de la composition en acides
aminés (minimum : 80 p.100),
- l'essai limite des chlorures (7 p.100).

8.1.3. Le titrage biologique
Il est fondé sur la détermination de l'activité hypocalcémiante chez la rat par rappo.
une préparation de référence internationale de calcitonine de saumon ou d'une prép
ration d'activité connue exprimée en Unités Internationales. Les Pharmacopées eurc
péenne et française indiquent deux méthodes alternatives : une par injection intravei­
neuse, l'autre par injection sous-cutanée. La calcémie du rat est déterminée par
spectrophotométrie d'absorption atomique. La valeur de l'activité est au moins de
4 000 Ul.mg-1 de peptide.
Diverses techniques ont été proposées pour cet essai, avec des unités de mesure
d'activité différentes qui ont donné lieu pendant longtemps à confusion et controverse
(Unités Hirsch, Hammersmith ou Baghdiantz, Milhaud et Medical Research Council-
MRC). Actuellement le protocole des Pharmacopées s'impose avec un étalon interna­
tional de calcitonine porcine (1989) préparé par le British National Institute for
Biological Standards and Control (NIBSC) et titré en Unités Internationales (Ul.mg-1).
20 jig de cet étalon correspondent sensiblement à 128 Ul. 1 Ul actuelle est équiva­
lente à 1 Unité MRC ancienne. A titre indicatif, l'Unité MRC équivaut à 100 fois la dose
provoquant en 50 mn une baisse de 10 % de la calcémie d'un rat de 150g. Il existe en
fait plusieurs étalons correspondant aux calcitonines de diverses origines actuelle­
ment utilisées.